SOTTOCAPITOLO 1
ANALISI QUALITATIVA E QUANTITATIVA DELLA TRASCRIZIONE. NORTHERN RELATIVA, DOT BLOT (ASO PROBE/ UTILIZZO DIAGNOSI TALASSEMIE), RT-PCR RELATIVA, RT-PCR APPLICAZIONI, RACE. INIZIO E TERMINE DELLA TRASCRIZIONE: S1 MAPPING E PRIMER EXTENSION. ATTIVITÀ DI UN PROMOTORE TRAMITE GENI REPORTER. CENNI SULL’USO DEI MICROARRAY PER LO STUDIO DELL’ESPRESSIONE GENICA.
SOTTOCAPITOLO 2
METODI DI STUDIO DELLE INTERAZIONI FRA MACROMOLECOLE. ONE-HYBRID (DNA-PROTEINA). TWO-HYBRID ORIGINALE, REVERSE E SPLIT HYBRID (PROTENA-PROTEINA). TWO-HYBRID ALTERNATIVI (SOS RECRUITMENT, SPLIT-UBIQUITIN). THREE HYBRID (PROTEINE-PROTEINE, RNA-PROTEINE).
SOTTOCAPITOLO 3
SISTEMI DI ESPRESSIONE IN PROCARIOTI ED EUCARIOTI. ESPRESSIONE DI PROTEINE IN ESCHERICHIA COLI. PROMOTORI INDUCIBILI. SISTEMI DI FUSIONE PER LA PURIFICAZIONE E LOCALIZZAZIONE DI PROTEINE (UBIQUITINA, IMPACT, TAP TAGGING, GFP).
ESPRESSIONE IN LIEVITO. MARCATORI AUXOTROFICI E DOMINANTI. VETTORI (INTEGRATIVI, EPISOMICI, YAC). BIOLOGIA DEL 2 MICRON. GENE TARGETING. POP-IN E POP-OUT. VETTORI DI ESPRESSIONE PER LIEVITO: PROMOTORI COSTITUTIVI ED INDUCIBILI. SISTEMA GAL. PLASMID SHUFFLING. VETTORI AD AUTOSELEZIONE. ESPRESSIONE DI PROTEINE SIA INTRACELLULARI CHE SECRETE (PATHWAY SECRETIVO E MODIFICAZIONI CO/POST-TRADUZIONALI DELLE PROTEINE). PARETE CELLULARE. YEAST-BASED SCREENING. YEAST SURFACE DISPLAY: APPLICAZIONI.
ESPRESSIONE IN EUCARIOTI SUPERIORI. SISTEMI DI TRASFEZIONE DI LINEEE CELLULARI DI MAMMIFERO. ESPRESSIONE TRANSIENTE E TRASFORMANTI STABILI; MARCATORI DI SELEZIONE (TK E DHFR, MARCATORI DOMINANTI). PROMOTORI COSTITUTIVI ED INDUCIBILI (TET-ON E TET-OFF).
CELLULE DI INSETTO: IL SISTEMA DEL BACULOVIRUS.