Biacore X100 (SPR, surface plasmon resonance)

Biacore X100 (Cytiva; https://www.cytivalifesciences.com/en/us/about-us/our-brands/biacore) è una strumentazione basata sul fenomeno della Risonanza Plasmonica di Superficie (SPR, Surface Plasmon Resonance) che permette l’analisi di interazioni tra biomolecole in tempo reale e senza la necessità che queste siano marcate. È un sistema ad elevata sensibilità strumentale con utilizzo di quantità minime di volumi di campione per la misura diretta dei parametri cineticie di affinità dell’interazione.
Applicazioni:
- Caratterizzazione del legame molecolare mediante determinazione delle costanti di velocità di dissociazione (kd) nell’intervallo 10 -5 - 0.1 s -1 ; costante di velocità diassociazione (ka) nell’intervallo 10 3 –10 7 M –1 s –1 ; costante di dissociazione (KD-Affinità): da 10 -9 a 10 -4 M.
- Analisi di campioni che vanno dall’elevato peso molecolare (proteine, DNA, RNA,anticorpi, polisaccaridi, lipidi, cellule, etc.) al basso peso molecolare (>100 Da) in diversi tamponi salini e anche in soluzioni contenenti
dimetilsolfossido (DMSO)
-Identificazione di ligandi per uno specifico target (Ligand Fishing).
-Intervallo operativo di temperatura: 4-40°C.
-Disponibilità di un ampio range di sensor chip che assicurano la scelta della superficie del sensore più adatta alla natura delle molecole da immobilizzare e alla richiesta di analisi. Chip prodotti dalla tecnologia Biacore: CM7, CM5, CM4, CM3 e C1 con gruppi attivi carbossimetilati; SA per ligandi biotinilati; NTA per proteine con His Tag; HPA per creare un monostrato lipidico; L1 per creare un doppio strato lipidico; AU per attivare direttamente i ligandi su lamina d’oro. Capture kits sono disponibili per una ampia varietà di tags e molecole che includono proteine di fusione con GST; anticorpi IgG di topo; anticorpi IgG di uomo.

- Approccio analitico denominato “Single Cycle Kinetics (SCK)”, alternativo alla tecnica dell’analisi cinetica tradizionale multiciclica, che permette riduzione dei tempi di analisi, riduzione del consumo di ligando e disegno sperimentale semplificato.

- Software Implementato con tecnica denominata CFCA (Calibration Free Concentration Analysis) che permette di calcolare in modo accurato la concentrazione attiva di proteine in assenza di calibrazione oltre a quella del
metodo tradizionale che prevede la creazione di una curva standard di campione.